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貨號 | 產品名稱 | 規格 |
AS6321242 | α葡萄糖苷酶（α GC）測試盒（比色法） | 100管/48樣 |
AS6321242 | α葡萄糖苷酶（α GC）測試盒（比色法） | 50管/24樣 |
測定意義：
α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖，不僅與細胞壁的松弛或加固有關，而且與細胞識別和一些信號分子產生密切相關。
測定原理：
α-GC分解對-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成對-硝基，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算α-GC活性。
自備用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入12mL蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體15mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至400nm，蒸餾水調零。
加樣表
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 120 | |
蒸餾水 | 120 | |
試劑二 | 150 | 150 |
樣本 | 30 | 30 |
充分混勻，放入37℃準確水浴30min后，立即放入95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變），8000g，4℃，離心5min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑）
上清液 | 70 | 70 |
試劑三 | 130 | 130 |
充分混勻，室溫靜置2min后， 400nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。
每個測定管需設一個對照管。
α-GC活力計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.00585x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.114×(ΔA +0.0027)
V反總：反應體系總體積，0.3mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬；T：反應時間，30min。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0039x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.171×(ΔA +0.0027)
V反總：反應體系總體積，0.3mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬；T：反應時間，30min。
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