植物可溶性糖含量測(cè)試盒（比色法）

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測(cè)定意義：

糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。可溶性糖是指樣品中的還原單糖及在本法測(cè)定條件下能水解成還原單糖的蔗糖、麥芽糖和可部分水解為葡萄糖的淀粉。

測(cè)定原理：

蒽酮比色法。可用于可溶性單糖、寡糖和多糖的含量測(cè)定，具有靈敏度高﹑簡(jiǎn)便快捷﹑適用于微量樣品的測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、沸水浴、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、濃硫酸（不允許快遞）研缽、和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：粉劑×1瓶，4℃避光保存；
試劑二：10mL×1瓶 ，4℃保存；

樣品中可溶性糖的提取：

稱取0.1~0.2g樣本，加入1mL蒸餾水研磨成勻漿，倒入有蓋離心管中，95℃水浴10min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清液于10ml試管中，用蒸餾水定容至10mL，搖勻備用。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95度。

3、工作液的配制：在試劑一中加入2.5mL試劑二。充分溶解后使用，如較難溶解，可加熱攪拌；用不完的試劑4℃保存一周；

4、加樣表（在EP管中反應(yīng)）：

混勻，置95度水浴中10min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至室溫后，取200 uL轉(zhuǎn)移至微量石英比色皿或96孔板中，于620nm處，分別讀取空白管和測(cè)定管吸光值，ΔA=A測(cè)定管-A空白管。

注意：1、空白管只要做一管。

      2、如果ΔA大于1，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

3、由于濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性，請(qǐng)謹(jǐn)慎操作。

可溶性糖含量計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 8.55x - 0.07；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、按樣本鮮重計(jì)算：

可溶性糖（mg /g鮮重）= [(ΔA＋0.07) ÷8.55×V1]÷（W×V1÷V2）=1.17×(ΔA＋0.07) ÷W。

3、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

可溶性糖（mg /mg prot）=[ (ΔA＋0.07) ÷8.55×V1]÷(V1×Cpr)=0.117×(ΔA＋0.07) ÷Cpr。

V1：加入樣本體積，0.04mL；V2：加入提取液體積，10mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 4.275x - 0.07；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、按樣本鮮重計(jì)算：

可溶性糖（mg /g鮮重）= [(ΔA＋0.07) ÷4.275×V1]÷（W×V1÷V2）=2.34×(ΔA＋0.07) ÷W。

3、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

可溶性糖（mg /mg prot）= [(ΔA＋0.07) ÷4.275×V1]÷(V1×Cpr)=0.234×(ΔA＋0.07) ÷Cpr。

V1：加入樣本體積，0.04mL；V2：加入提取液體積，10mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：檢測(cè)限為1mg/g鮮重或10ng/ mg prot

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