【??參數信息】
英文名稱：K599 Electrocompetent Cell
中文名稱：K599農桿菌電轉感受態細胞
規格：10ul,10x50ul
運輸：低溫運輸
純度：≥95%
儲存條件：-20℃避光干燥
生產廠商：西安強化生物科技
【簡單概述】
K599農桿菌電轉感受態細胞是一種發根農桿菌（Agrobacterium rhizogenes） 的基因工程工具，具有以下核心特征：
菌株特性：
攜帶 pRi2659農桿堿型Ri質粒（agropine type Ri plasmid），賦予其strR。
屬于革蘭氏陰性土壤細菌，可感染多種植物（如雙子葉植物、單子葉植物及裸子植物），宿主范圍廣泛（葫蘆科、豆科、茄科等）。
從黃瓜中分離，常用于植物毛狀根轉化研究。
設計：
經特殊工藝制備，用于大質粒轉化優化，轉化效率高。
配套提供對照質粒。
【實驗步驟】
一、實驗前準備
材料與試劑
K599電轉感受態細胞（-80℃保存，避免反復凍融）
純化質粒DNA（建議試劑盒抽提，雙蒸水溶解）
預冷的0.1 cm電擊杯（Gene Pulser®規格）
無抗生素的YEB/LB液體培養基
含相應抗生素的YEB/LB固體平板
冰浴設備、電轉儀（如Bio-rad）
電擊杯預處理
從75%乙醇儲存液中取出電擊杯，倒置瀝干5分鐘，再正置5分鐘使乙醇揮發干凈
立即插入碎冰中預冷5分鐘，壓實冰面，杯頂離冰面0.5 cm以便蓋蓋
二、操作步驟
感受態細胞與質粒混合
取-80℃保存的K599感受態細胞，手心輕握部分融化后插入冰浴5分鐘
每50μl感受態細胞加入0.1-1μg質粒DNA（體積≤感受態體積的1/10，即≤5μl）
用槍頭輕輕吹打混勻（避免氣泡），冰浴靜置1分鐘
電擊轉化
將混合液快速轉移至預冷的電擊杯中，蓋緊杯蓋
設置電轉儀參數（以下為常用參數，可選其一）：
Bio-rad推薦：電壓2400-2500V，電容25μF，電阻200Ω
或參考儀器自帶農桿菌Protocol
啟動電擊，完成后迅速將電擊杯插入冰中冷卻
復蘇培養
向電擊杯中加入700-900μl無抗生素的YEB/LB培養基
用槍吹吸混勻，轉移至無菌離心管中
28℃、150-200 rpm振蕩培養2-3小時
涂布與培養
6000 rpm離心1分鐘，棄上清（保留約100μl液體）
輕柔吹打重懸菌體，涂布于含抗生素的YEB/LB平板
28℃倒置培養2-3天，觀察單菌落。
【相關試劑】
MPP+ iodide
NAD氧化型輔酶I
3-Estradiol β-峨二醇
GV3101 Electrocompetent cell
AGL1 Electrocompetent cell
EHA101 Chemically Competent Cell
EHA105 Chemically Competent Cell
LBA4404 Chemically Competent Cell
AGL1 Chemically Competent Cell
GV3101 Chemically Competent Cell
MSU440 Chemically Competent Cell
Ar 1193 Electrocompetent Cell
ATCC15834 Electrocompetent Cell
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。
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