核酸染料SYBR14 Nucleic Acid Stain

試劑名稱：SYBR14NucleicAcidStain(5mM)綠色熒光核酸染料【精子活力染料】

儲(chǔ)存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運(yùn)輸。

產(chǎn)地：西安強(qiáng)化生物

吸收波長(zhǎng)：488nm

發(fā)射波長(zhǎng)：518nm

一、描述與基本特性

核酸染料SYBR14 Nucleic Acid Stain通常用來(lái)監(jiān)測(cè)精子活力，通過(guò)聯(lián)合SYBR 14和碘化丙啶（PI）的雙染方式能評(píng)估精液中的活精子占比。

SYBR 14是一種核酸染料，與DNA結(jié)合后的吸收波長(zhǎng)是488nm，發(fā)射波長(zhǎng)是518nm。

核酸染料SYBR14 Nucleic Acid Stain將活精子的核染成明亮綠色，反之，PI僅將喪失膜完整性的無(wú)運(yùn)動(dòng)精子染成紅色。

活/死精子的占比通過(guò)先用SYBR/PI染色，之后再用流式分析染料攝取的方法進(jìn)行判斷。

本品以DMSO儲(chǔ)存液形式提供，濃度為5mM。只需用合適的生理緩沖液稀釋到工作濃度進(jìn)行簡(jiǎn)單孵育即可，適用于哺乳動(dòng)物精液樣本。

二、作用機(jī)制

（一）與DNA結(jié)合的分子機(jī)制

SYBR14通過(guò) 插入DNA雙鏈的小溝槽實(shí)現(xiàn)特異性結(jié)合。其平面分子結(jié)構(gòu)可嵌入堿基對(duì)之間，結(jié)合后分子構(gòu)象剛性增強(qiáng)，導(dǎo)致熒光量子產(chǎn)率提升。

結(jié)合常數(shù)（Kb）較高，表明結(jié)合牢固，但非共價(jià)結(jié)合，允許競(jìng)爭(zhēng)性取代（如被PI取代）。

（二）活細(xì)胞特異性染色機(jī)制

活細(xì)胞：

SYBR14進(jìn)入細(xì)胞后，被胞內(nèi)酯酶水解，脫酰基化產(chǎn)物帶負(fù)電荷，無(wú)法反向跨膜逸出，因此被"困"在細(xì)胞內(nèi)，持續(xù)結(jié)合DNA發(fā)出綠色熒光。

死細(xì)胞：

膜完整性喪失導(dǎo)致染料自由出入，無(wú)法有效滯留；同時(shí)PI等膜不通透染料可競(jìng)爭(zhēng)性進(jìn)入，取代SYBR14的結(jié)合位點(diǎn)。

（三）精子活力檢測(cè)中的雙染機(jī)制（SYBR14 + PI）

在精子活力分析中，SYBR14與 碘化丙啶聯(lián)用，形成互補(bǔ)染色系統(tǒng)：

SYBR14：標(biāo)記膜完整活精子 → 綠色熒光核。

PI：僅進(jìn)入膜破損死精子 → 紅色熒光核（PI與DNA結(jié)合后發(fā)射波長(zhǎng)617nm）。

中間態(tài)（瀕死精子）：

當(dāng)精子從活向死過(guò)渡時(shí)，PI從精子頭部后端向前端擴(kuò)散，逐步取代SYBR14，呈現(xiàn) 雙染（綠+紅） 的過(guò)渡狀態(tài)，熒光從綠向紅轉(zhuǎn)變僅需1分鐘。

以上由西安強(qiáng)化生物小編xxn整理

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