微生物實驗室使用需從個人防護、無菌操作、環(huán)境管理、樣本處理、儀器使用、廢棄物處理、應(yīng)急管理七個方面遵循規(guī)范,具體如下:
一、個人防護要求
實驗全程必須穿戴合格的個人防護裝備,基礎(chǔ)配置為長袖扣扣實驗服、醫(yī)用口罩、一次性手套,處理感染性材料需更換N95口罩,高危操作需額外增加護目鏡、鞋套防護;禁止穿涼鞋、拖鞋、露趾鞋進入實驗室,長發(fā)要妥善束扎,不佩戴松散首飾;離開實驗室前必須脫下防護裝備、洗手,嚴(yán)禁穿實驗服、戴手套進入餐廳、辦公室等公共區(qū)域,也不能戴手套觸碰門把手、電梯按鈕等公共物品。
二、無菌操作規(guī)范
所有接觸樣本的器皿、工具都必須提前滅菌:玻璃器皿多采用干熱滅菌,接種環(huán)/針使用前要火焰燒灼全部金屬絲,冷卻后再使用;取樣或接種必須在酒精燈外焰保護區(qū)域操作,嚴(yán)禁用嘴直接吸吸管,必須使用橡皮頭吸取;操作過程中器具開口端要避免觸碰外露部位、容器壁,降低雜菌污染風(fēng)險。
三、實驗環(huán)境管理
無菌間/實驗室需分區(qū)管理,保持清潔,不存放與實驗無關(guān)的物品;使用前后都要關(guān)閉門窗,開啟紫外燈照射消毒至少30分鐘,燈管每兩周需用酒精擦拭除垢;超凈臺操作前要用75%酒精擦拭,提前30分鐘開紫外燈滅菌,操作時開風(fēng)機調(diào)整合適風(fēng)量,操作完成后及時清理消毒,定期更換過濾器;做樣時關(guān)閉窗戶和空調(diào),避免空氣流動增加污染風(fēng)險。
四、培養(yǎng)基與樣本處理
培養(yǎng)基優(yōu)先現(xiàn)配現(xiàn)滅菌,未滅菌的配好培養(yǎng)基不能隔夜存放,滅菌后冰箱保存不超過一周,遵循“先入先出”原則;使用時水浴融化后要及時降溫,傾倒培養(yǎng)基溫度控制在45℃左右,每瓶培養(yǎng)基都要做空白對照,排除污染干擾;采樣要保證器具無菌,樣本采集具備代表性,樣品計量、稀釋倍數(shù)都要準(zhǔn)確,鹽水溫度控制在40℃左右,避免過熱燙死微生物或過低無法溶解樣品,操作時樣本容器開口需提前酒精消毒,避免器具觸碰瓶口造成污染。
五、儀器使用規(guī)范
使用高壓蒸汽滅菌鍋時,要提前檢查設(shè)備密封性、壓力表,排盡冷氣后再升壓,滅菌結(jié)束后液體類物品需自然冷卻至60℃以下再開蓋,防止爆破;培養(yǎng)箱要隨時監(jiān)控溫度,根據(jù)微生物種類維持合適的培養(yǎng)條件,做好溫度記錄;所有電器設(shè)備要定期檢查,保證接地合格,配置漏電保護器,避免安全隱患。
六、廢棄物處理要求
實驗廢棄物必須分類處理:銳器要放入專用黃色防刺穿銳器盒,裝載不超過3/4后由專業(yè)機構(gòu)處理;感染性廢物(培養(yǎng)物、接觸過病原的耗材等)必須經(jīng)高壓滅菌121℃ 30分鐘后,用雙層防滲漏垃圾袋密封標(biāo)注,再移交專業(yè)處置;液體生物廢物加漂白粉消毒后排放,固體可燃性廢物統(tǒng)一焚燒,實驗動物尸體需交由指定單位深埋或焚燒,嚴(yán)禁隨意丟棄。
七、應(yīng)急管理要求
實驗室須配備急救箱、滅火器、消毒設(shè)備等應(yīng)急物資,張貼緊急聯(lián)系電話;若發(fā)生感染性物質(zhì)溢出,立即用浸過消毒劑的布料覆蓋,用鑷子清理玻璃碎片,不能徒手處理;個人防護破損要立即停止實驗,用75%酒精消毒皮膚并徹底清洗,更換防護裝備;發(fā)生火災(zāi)、自然災(zāi)害等要立即停止實驗,有序撤離。