Amicon® Ultra超濾管 | 使用過程中的常見問題

之前我們有幾期文章介紹了使用默克Amicon^® Ultra超濾管的應用場景（分離外泌體、濃縮病毒），有很多老師反饋了一些超濾管使用時的問題，針對其中問的比較多的問題，小編特意進行了收集、整理。今天給大家介紹超濾管的使用過程中，離心力g與RPM的換算及常見問題的解答。

從離心機廠家文件上查閱轉子半徑，或像以下圖示這樣自己測量轉子半徑。

繪制轉子半徑和建議的RCF（離心力g）圖，連線確定RPM。

此列線圖實際是通過右側的公式計算得出的。

A1：Amicon^® Ultra超濾管的膜材質為默克密理博Ultracel^®再生纖維素膜，生產工藝嚴格，截留分子量明確而精準，蛋白吸附損失最小。

Q2：如果要用超濾的方法分離兩種蛋白，那么這兩個蛋白的大小需要相差多少？

A2：按照經驗，建議兩個蛋白的分子量要相差一個數量級（10倍）。

Q3：Amicon^® Ultra超濾管可以用于病毒濃縮么？

A3：可以。對于慢病毒推薦Amicon^® Ultra 100 kDa； 對于腺病毒推薦Amicon^® Ultra 50kDa。具體的操作步驟可以參考病毒濃縮純化試劑盒FTLV00003和FTAV00003的產品使用說明書。另提供AAV（腺相關病毒）的制備方法供參考。

Q4： Amicon^® Ultrar超濾管可以用酒精消毒滅菌么？

A4：Amicon^® Ultra與70%乙醇是兼容的，但是對滅菌處理的具體方法沒有做相關的測試，所以無法提供更進一步的參考信息。建議采用Ultrafree無菌離心管對濃縮后的樣品進行過濾除菌。

Q5：Amicon^® Ultra超濾裝置是否可以用于高壓滅菌？

A5：Amicon^® Ultra都是采用熱封設計，不可以用高壓高溫滅菌。

Q6：Amicon^® Ultra超濾管是否不含RNA酶？

A6：不保證超濾管不含RNA酶，建議用0.1% DEPC在37度浸泡2h，以滅活RNA酶；殘留的DEPC可以用Milli-Q^®超純水洗滌除去。

Q7：用Amicon^® Ultra超濾管去除去污劑是有什么需要注意的嗎？

A7：去污劑因其性質，當濃度大于臨界微團濃度（Critical Micelle Concentration, CMC）時，去污劑分子會聚集形成微團而改變分子構象，這有可能會影響去污劑的去除效果。

Q8：蛋白在濃縮時出現了沉淀，如何改進？

A8：蛋白如果濃縮過快或者過度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。建議蛋白濃縮后的最終濃度不超過20mg/ml。對于對濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，建議的改進方法是：

Q9：有時候用超濾離心管連水都離不下來，可能是什么原因？

A9： Amicon^® Ultra超濾膜中含有微量甘油。 如果出現這種情況，請先用0.1N NaOH清洗再離心。最后用緩沖液或Milli-Q^®水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應立即使用，如暫時不用，請保持潤濕狀態，避免重新干燥。

Q10：說明書中推薦在室溫下進行離心，考慮到蛋白的穩定性，是否可以在4℃進行離心？
A10：可以，但是低溫會增加蛋白樣品的粘性，導致流速減慢，建議可將離心時間延長到原來的1.5倍。