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過氧化物酶（Peroxidase，POD）檢測服務-齊一生物

2021-3-9　　閱讀(3344)

過氧化物酶(Peroxidase，POD)檢測服務-齊一生物

過氧化物酶(Peroxidase，POD)試劑盒說明書

For Research Use only

僅供研究用

貨號：QYS-23031

微量法 100管/96樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，可催化*氧化酚類和胺類化合物，具有消除*和酚類、胺類毒性的雙重作用。

測定原理：

POD 在有*存在的情況下，能使愈創木酚發生氧化，生成茶褐色物質，該物質在 470nm 有大光吸收。

過氧化物酶(Peroxidase，POD)檢測服務-齊一生物需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 0.2mL×1 瓶，4℃保存；用時加入 3mL 試劑一充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量

（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 470nm，蒸餾水調零。

2、測定前將試劑一、二和三在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）放置 10min 以上。

3、樣本測定表

試劑名稱（µL）測定管

試劑一 120

試劑二 30

試劑三 30

蒸餾水 60

樣本 5

在EP管中按順序加入上述試劑，立即混勻并計時，立即取200µL轉移至微量石英比色皿或 96 孔板中按順序加入上述試劑，記錄 470nm 下 30s時的吸光值 A1 和 1min30s 后的吸光值 A2。計算 ΔA＝A2-A1。

注意：

1、若一次性測定樣本較多，可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液，在 37℃（哺

乳動物）或 25℃（其它物種）放置 10min 以上，測定時加入 10µL 樣本和 240µL 混合液測

定。

2、如果 ΔA 小于 0.005，可將反應時間延長到 5min。如果 ΔA 大于 0.5，可將樣本用提取液稀釋后測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數。

過氧化物酶(Peroxidase，POD)檢測服務-齊一生物POD 活性計算：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）POD 活性

單位定義：每 mL 血清（漿）在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個酶活力單位。計算公式：

POD（U/mL）=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =4900×ΔA

2、組織、細菌或細胞 POD 活性

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個酶活力單位。

POD（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.01÷T =4900×ΔA÷Cpr

蛋白質含量需另外測定，我司提供三種方法蛋白質濃度試劑盒(QYS-237009)雙縮脲法、(QYS-237011)考馬斯亮藍法、(QYS-237013)BCA法。

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每 g 組織在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個酶活力單位。

POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =4900×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位定義：每 1 萬個細菌或細胞在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個酶活力單位。

POD（U/104 cell）＝ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =9.8×ΔA

V 反總：反應體系總體積，0.25mL； V 樣：加入樣本體積，0.01mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量；500：細菌或細胞總數，500 萬。

用 96 孔板測定的計算公式如下

1、血清（漿）POD 活性

單位定義：每 mL 血清（漿）在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.005 為一個酶活力單位。

POD（U/mL）=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.005÷T =9800×ΔA

2、組織、細菌或細胞 POD 活性

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.005 為一個酶活力單位。

POD（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.005÷T =9800×ΔA÷Cpr

蛋白質含量需另外測定，我司提供三種方法蛋白質濃度試劑盒(QYS-237009)雙縮脲法、(QYS-237011)考馬斯亮藍法、(QYS-237013)BCA法。

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每 g 組織在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.005 為一個酶活力單位。

POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =9800×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

過氧化物酶(Peroxidase，POD)檢測服務-齊一生物單位定義：每 1 萬個細菌或細胞在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.005 為一個酶活力單位。

POD（U/104 cell）＝ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =19.6×ΔA

V 反總：反應體系總體積，0.245mL； V 樣：加入樣本體積，0.005mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

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