人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白（AFP）ELISA試劑盒

試劑盒名稱：人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白（AFP）ELISA試劑盒

檢測用所有試劑全部都為進口試劑，適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本，靈敏度*，多年專業酶免服務，我們保證對所售任何產品一概負責到底，每一份實驗結果都真實可靠！各檢測項目酶免（ELISA）試劑盒具備,*,定貨及時,送貨上門.此外,我公司還提供樣本代測服務。

規格：48T/96T

人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白（AFP）ELISA試劑盒 組織樣品前處理：
①1g組織切碎后加5倍體積的TBS，用均質器均質（10次）。 組織勻漿5000×g，4℃離心20分鐘
TBS：50 mmol/L Tris-HCl ,  pH 7.6, 150 mmol/L NaCl ,  蛋白酶抑制劑 [0.1 mmol/L 二異丙基氟磷酸鹽 , 0.5 mmol/L 苯甲磺酰氟 , 1 g/mL甲苯磺酰-L-賴氨酸氯甲基酮鹽酸鹽, 1 g/mL抗痛素, 0.1 g/mL亮肽素]
②沉淀物懸浮與5倍體積的TBA/蛋白酶抑制劑（含1 mol/L蔗糖），5000×g，4℃離心20分鐘。
③沉淀物中加入3倍體積的1％Triton X-100/TBS/蛋白酶抑制劑，勻質（10次）。37℃孵育15分鐘后，5000×g離心20分鐘。
④沉淀物和勻質物中加入3倍體積的2％SDS/TBS/蛋白酶抑制劑到。組織勻漿37℃孵育15分鐘后，500000×g 25℃離心。
⑤沉淀物中加1mL 70％蟻酸到，超聲破碎后5000×g 4℃離心
⑥收集上清液并用離心濃縮（Speed Vac）干燥。加100μL DMSO并短時超聲破碎成懸液。零下80℃儲存這個DMSO－蟻酸溶解的改組織溶液直到使用。
⑦檢測時，依照說明書所寫，用試劑盒中的標準稀釋液溶解樣本。

操作步驟：
實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。
溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

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