LS174T人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
名稱 | LS 174T [LS174T] (人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) (STR鑒定正確) |
別稱 | Ls174T; LS174t; Ls-174-T; LS-174-T; LS 174 T; LS-174T; Ls-174T; LS 174T; LS-174; LS174 |
種屬 | 人類 |
年齡（性別） | 女性，58歲 |
組織來源 | 直腸；結(jié)直腸腺癌 |
生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
背景描述 | LS 174T細(xì)胞是LS 180細(xì)胞的胰蛋酶化變種。LS 174T細(xì)胞比親本更易傳代，像LS 180細(xì)胞一樣生成大量的癌胚抗原(CEA)。電鏡研究表明，LS 174T細(xì)胞有豐富的微絲和細(xì)胞質(zhì)粘液素液泡。LS 174T細(xì)胞直腸抗原3陽性；p53抗原表達(dá)陰性，但mRNA表達(dá)陽性。LS 174T細(xì)胞角蛋白染色陽性；LS 174T細(xì)胞癌基因c-myc、N-myc、H-ras、N-ras、Myb和fos的表達(dá)呈陽性；癌基因k-ras和sis的表達(dá)未做檢測。 |
生物安全等級 | 1 |
生長培養(yǎng)基 | MEM(PM150467 ATCC改良)＋10% FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120) |
推薦傳代比例 | 1:2-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時(shí)間 | ~30-40小時(shí) |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
致瘤性 | Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells). |
抗原表達(dá)情況 | serologically defined colon cancer antigen 3; Homo sapiens, expressedHLA A2, B13, B50; Blood Type O |
基因表達(dá)情況 | carcinoembryonic antigen (CEA), interleukin 10 (IL-10), interleukin 6 (IL-6), mucinThe production of CEA in the ATCC seed stock was 1944 ng per 10^6 cells in 10 days. |
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CL-188 ATCC; CCL-188BCRC; 60053 DSMZ; ACC-759 ECACC; 87060401 |
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。
8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代。
9. 注意： 1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。
公司正在出售的產(chǎn)品：
FⅨ ELISA Kit | 核桃源性成分PCR試劑盒 |
Vasorin(VASN)ELISA Kit | 肺炎克雷伯菌PCR試劑盒 |
Activating Transcription Factor 4(ATF4)ELISA Kit | 波薩達(dá)斯球孢子菌PCR檢測試劑盒 |
ICA ELISA Kit | 肉芽腫鞘桿菌PCR檢測試劑盒 |
GP-BB ELISA Kit | 不動(dòng)桿菌屬通用PCR試劑盒 |
Adenylate Cyclase 8, Brain(ADCY8)ELISA Kit | 月季花探針法PCR鑒定試劑盒 |
TSGF ELISA Kit | 中間普雷沃菌PCR試劑盒 |
Vitamin D3，VD3 ELISA Kit | 波氏奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒 |
Adenylosuccinate Synthase(ADSS)ELISA Kit | 伯氏疏螺旋體（伯氏包柔螺旋體）PCR試劑盒 |
VD3 ELISA Kit | 中間葡萄球菌PCR檢測試劑盒 |
Kim-1 ELISA Kit | DPD 小鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉ELISA檢測試劑盒 |
Vascular Endothelial cell Growth Factor，VEGF ELISA Kit | Ⅰ型膠原交聯(lián)氨基端肽(NTXⅠ)ELISA試劑盒 |
VCAM-1 ELISA Kit | LS174T人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞腫瘤壞死因子超家族15(TL1A/TNFSF15)ELISA試劑盒 |
Adenylate Cyclase 4(ADCY4)ELISA Kit | ⅡA組磷脂A2(PLA2G2A)ELISA試劑盒 |
Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule，ALCAM ELISA Kit | Ⅲ型膠原蛋白(COL Ⅲ)ELISA試劑盒 |
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